REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA:

LO HICISTE EN EL LABORATORIO...???   NO TE PREOCUPES, UN VIDEO

MUY DIDACTICO, HASTA PONERLO EN PRACTICA...

La reacción en cadena de la polimerasa, PCR (polymerase chain reaction), es una técnica desarrollada a mediados de los años 80 por Kary Mullis . La cual nos permite producir in vitro múltiples copias de un fragmento de ADN específico, incluso en presencia de millones de otras moléculas de ADN.

Esta técnica se basa en la actividad de la DNA polimerasa la cual es capaz de sintetizar una cadena de DNA complementaria a otra ya existente. Sus únicos requerimientos son que existan nucleótidos (A,G,C y T) en el medio, que son la materia base para fabricar el ADN , además una pequeña cadena de ADN que pueda unirse a la molécula que se desea copiar para que sirva como molde, cebador ("primer").

La sensibilidad de la técnica de PCR es muy alta sin embargo presenta algunos inconvenientes, como : NO ES UNA TECNICA CUANTITATIVA, además existe una  probabilidad relativamente alta de obtener falsos positivos por contaminación.

Para solucionar este último problema  debe optimizarse la secuencia de los cebadores, así como precisar la  Tº para que estos se unan al ADN en la localización correcta y debes realizar una adecuada manipulación de los reactivos.

Por otro lado para solucionar el problema de la cuantificación se han generado unas variaciones sobre el esquema inicial de la PCR, dando lugar a lo que se conoce como PCR CUANTITATIVA  o PCR EN TIEMPO REAL quien nos da la posibilidad de detectar en tiempo real la amplificación de nuestro genoma de interés. Este metodo está basado en la utilización de un fragmento diferente de ADN (sonda) complementario a una parte intermedia del ADN que queremos amplificar. Esta sonda lleva adherida una molécula fluorescente y otra molécula que inhibe esta fluorescencia ("quencher"), de tal forma que sólo cuando la sonda es desplazada de su sitio por acción de la ADN polimerasa la molécula fluorescente se libera de la acción del "quencher" y emite fluorescencia al ser iluminada con un láser.

La cuantificación de la fluorescencia emitida durante cada ciclo de la PCR será proporcional a la cantidad de ADN que se está amplificando.